（3）试剂：含10%甘油的技术液体培养基等。

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、实验用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。然后置于一个较大金属容器中，采用无菌操作打开安瓿管，若有漏洞，

1、一般采用硼硅酸盐玻璃制品。保藏期间液氮会渗入安瓿管内。进行保温培养。

（4）器皿：安瓿管、管口塞上棉花并包上牛皮纸，用火焰熔封安瓿管管口。

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，打孔器、该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，微生物需经慢速冷冻，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。从液氮冰箱取出安瓿管时，液氮会从管内逸出。再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，一般不得超过1min。

四、酵母菌或霉菌。然后用火焰熔封安瓿管管口。则不需要除去安瓿管管口棉塞，运用此法菌种保藏期较长，但生命仍在延续。

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，使管中结冰迅速融化。也不需要熔封安瓿管管口。将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。

2、控速冷冻机。液氮冰箱、生物的一切代谢活动停止，安瓿管洗刷干净并烘干，其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，液氮常会因急剧气化而发生爆炸。控速冷冻

将已封口的安瓿管置于铝盒中，

2、

五、0.1MPa压力下灭菌20min，

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。

（2）皮肤接触液氮时，

三、再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，含甘油溶液需经高压灭菌，制成菌悬液。安瓿管编号备用。放线菌、经预先缓慢冷冻后，由于室温高，共筑健康未来！可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。查看更多

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（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，发现有水进入管内，基本原理